Χρώση Lactophenol Cotton Blue (LPCB).

Χρώση Lactophenol Cotton Blue (LPCB).

September 30, 2022 0 Von admin

Η χρώση Lactophenol Cotton Blue (LPCB) είναι μια απλή ιστολογική μέθοδος χρώσης που χρησιμοποιείται για τη μικροσκοπική εξέταση και αναγνώριση μυκήτων.

Αρχή της χρώσης Lactophenol Cotton Blue (LPCB).

Η μέθοδος χρώσης Lactophenol Cotton Blue (LPCB) λειτουργεί με βάση την αρχή της υποβοήθησης της αναγνώρισης των κυτταρικών τοιχωμάτων των μυκήτων.

  • Οι μύκητες είναι ευκαρυωτικοί οργανισμοί με μακροσκοπικά και μικροσκοπικά χαρακτηριστικά.
  • Το κυτταρικό τοίχωμα των σπορίων μυκήτων αποτελείται από χιτίνη της οποίας τα συστατικά του διαλύματος Lactophenol Cotton Blue λερώνονται για αναγνώριση.
  • Το διάλυμα μπλε βαμβακιού λακτοφαινόλης δρα ως διάλυμα στερέωσης καθώς και ως παράγοντας χρώσης.
  • Το διάλυμα είναι διαυγές και μπλε χρώματος και αποτελείται από ένα συνδυασμό τριών κύριων αντιδραστηρίων:
    • Φαινόλη: Λειτουργεί ως απολυμαντικό σκοτώνοντας κάθε ζωντανό οργανισμό
    • Γαλακτικό οξύ: Για τη διατήρηση των μυκητιακών δομών
    • Βαμβακερό μπλε: Για να λεκιάσει ή να δώσει χρώμα στη χιτίνη στο κυτταρικό τοίχωμα του μύκητα και σε άλλες μυκητιακές δομές
  • Ο λεκές θα δώσει στους μύκητες μια μπλε εμφάνιση των σπόρων και των δομών του μύκητα, όπως οι υφές.

Αντιδραστήρια χρώσης Lactophenol Cotton Blue (LPCB).

Ένα παρασκεύασμα 50 ml διαλύματος χρώσης βαμβακιού Lactophenol Blue αποτελείται από:

  • Απεσταγμένο νερό 50 ml
  • Cotton Blue (Μπλε ανιλίνης) 0,125γρ
  • Κρύσταλλοι Φαινόλης (C6H5Ο4) 50 γρ
  • Γλυκερίνη 100 ml
  • Γαλακτικό οξύ (CH3CHOH COOH) 50 ml
  • 70% αιθανόλη

Σημείωση: Το διάλυμα Lactophenol Cotton Blue παρασκευάζεται τουλάχιστον 2 ημέρες πριν από τη χρήση.

Παρασκευή διαλύματος Lactophenol Cotton Blue

Το διάλυμα Lactophenol Cotton Blue παρασκευάζεται για περισσότερες από δύο ημέρες αφήνοντας τα αντιδραστήρια αδιατάρακτα για να επιτραπεί η διάλυση και η ωρίμανση.

  1. Ημέρα 1: Διαλύστε το μπλε του βαμβακιού σε αποσταγμένο νερό και αφήστε το να ξεκουραστεί όλη τη νύχτα. Αυτό εξαλείφει την αδιάλυτη βαφή.
  2. Ημέρα 2: Χρησιμοποιώντας προστατευτικά γάντια, προσθέστε κρυστάλλους φαινόλης στο γαλακτικό οξύ σε ένα γυάλινο ποτήρι και ανακατέψτε με μαγνητικό αναδευτήρα μέχρι να διαλυθούν οι κρύσταλλοι.
  3. Προσθέστε γλυκερίνη
  4. Διηθήστε το Cotton blue και το απεσταγμένο νερό στο διάλυμα φαινόλης + γλυκερόλης + γαλακτικού οξέος και ανακατέψτε.
  5. Φυλάσσεται σε θερμοκρασία δωματίου.

Διαδικασία χρώσης Lactophenol Cotton Blue (LPCB).

  1. Σε μια καθαρή μικροσκοπική γυάλινη πλάκα, προσθέστε μια σταγόνα αιθανόλης 70%.
  2. Προσθέστε το δείγμα μυκήτων στη σταγόνα αλκοόλης χρησιμοποιώντας μια αποστειρωμένη βάση στήριξης, όπως βρόχο εμβολιασμού (από στερεό μέσο), ανάλογα με το δείγμα χρήσης.
  3. Πειράξτε το μυκητιακό δείγμα της αλκοόλης χρησιμοποιώντας μια βάση στήριξης βελόνας, για να βεβαιωθείτε ότι το δείγμα αναμιγνύεται καλά με το αλκοόλ.
  4. Χρησιμοποιώντας ένα σταγονόμετρο ή πιπέτα, προσθέστε μία ή δύο σταγόνες Lactophenol Cotton Blue Solution (που παρασκευάστηκε παραπάνω) πριν στεγνώσει η αιθανόλη.
  5. Καλύψτε προσεκτικά τον λεκέ με μια καθαρή αποστειρωμένη καλυπτρίδα χωρίς να δημιουργήσετε φυσαλίδες αέρα στον λεκέ.
  6. Εξετάστε τη χρώση μικροσκοπικά σε 40Χ, για να παρατηρήσετε για σπόρια μυκήτων και άλλες μυκητιακές δομές.

Αποτελέσματα και Ερμηνεία

Τα σπόρια των μυκήτων, οι υφές και οι καρποφόρες δομές χρωματίζονται μπλε ενώ το φόντο χρωματίζεται ανοιχτό μπλε.

Για παράδειγμα,

  • Aspergillus niger χρωματίζει τις υφές και τις καρποφόρες δομές σε ένα λεπτό μπλε με ανοιχτό μπλε φόντο.
  • Trichophyton mentagrophytes επίσης χρωματίζει τις υφές και τις καρποφόρες δομές σε ένα λεπτό μπλε με ανοιχτό μπλε φόντο.

Χρώση Lactophenol Cotton Blue (LPCB).

Εικόνα: Πρώτα: Scopulariopsis είδος σε μια κηλίδα μπλε βαμβακιού λακτοφαινόλης. Πηγή εικόνας: stylish_streaking και Senthil Prabhu.

Περιορισμοί

  • Μπορεί να χρησιμοποιηθεί μόνο ως υποθετική μέθοδος αναγνώρισης μυκήτων, η οποία θα πρέπει να ακολουθείται με άλλα διαγνωστικά εργαλεία, όπως βιοχημική και πολιτιστική εξέταση.
  • Τα συστατικά του διαλύματος θα πρέπει να χρησιμοποιούνται πριν από τη λήξη τους, συμπεριλαμβανομένης της χρήσης του διαλύματος πριν λήξει.
  • Το διάλυμα μπορεί να διαταράξει την αρχική μορφολογία των μυκήτων.
  • Ο λεκές μπορεί να χρησιμοποιηθεί μόνο για την αναγνώριση ώριμων μυκήτων και των δομών τους και όχι των νεαρών φυτικών μορφών μυκήτων.
  • Ο λεκές δεν μπορεί να αποθηκευτεί για μεγάλο χρονικό διάστημα.

Εφαρμογές

  • Χρησιμοποιείται για την αναγνώριση ύποπτων δειγμάτων μυκήτων.
  • Γενική αναγνώριση των μυκήτων και των δομών τους.

Αναφορές και Πηγές

  1. https://catalog.hardydiagnostics.com/cp_prod/Content/hugo/LactophenolCottonBlStn.htm
  2. http://www.himedialabs.com/TD/S016.pdf
  3. https://en.wikipedia.org/wiki/Lactophenol_cotton_blue
  4. μικρόβιο online/γαλαζοφαινόλη βαμβακιού
  5. https://laboratoryinfo.com/lactophenol-cotton-blue-lpcb/
  6. https://mycology.adelaide.edu.au/laboratory/lacto/
  7. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1706009/